复星长征 T-SPOT的检验原理

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复星长征 T-SPOT，是上海复星长征医学科学有限公司研究的。复星长征 T-SPOT是用于检测人外周抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T 细胞，仅适用于临床疑似结核病的辅助诊断。 复星长征 T-SPOT的检验原理是什么呢，通过资料我们了解到，复星长征 T-SPOT的检验原理是。外周血单个核细胞（PBMCs）从全血样本中被分离， 过洗涤排除本底干扰因素。记数 PBMCs，保证有标准的细胞数量用于检测。这可以保证因为免疫系统削弱 （免疫力低下和免疫抑制）而导致T 细胞浓度低的样本也有足够的细胞数加入反应孔检测。与ELISPOT 技术一样的洗涤和记数过 ，提高了检测结核病和结核感染的性能。 抗原和PBMCs一起孵育，刺激所有的致敏T 细胞。分泌的细胞因子被预包被在反应孔膜上的特异抗体捕获，然后细胞和其它不必要的物质 过洗涤被去除。标记二抗，碱性磷酸酶配对的与细胞因子上不同的抗原决定簇结合，在反应孔膜上捕获细胞因子。 过洗涤去除任何未标记的抗体。可溶的底物溶液加入到每个检测孔中，在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀斑点。每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T 细胞，记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T 细胞数量。 所以，复星长征 T-SPOT是用于检测人外周抗凝全血中的结核特异抗原刺激活化的效应T 细胞，仅适用于临床疑似结核病的辅助诊断。结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，作为免疫应答的一部分，T 细胞受结核抗原刺激致敏，形成活化的效应T 细胞，包括CD4 和CD8，从全血中单独被分离出来，在体外受特异抗原刺激并被记数。从结核分枝杆菌复合群 （人 、牛型、 非洲 ）中选择有用的抗原降低与BCG （卡介苗）和环境分枝杆菌的交叉反应提高特异性。两个单独的抗原模仿 ESAT-6 和 CFP 10，联合应用提高检测灵敏度。 复星长征 T-SPOT.TB 是一种更简单的酶联免疫斑点（ELISPOT）检测方法。ELISPOT 检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前，其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。这使得ELISPOT 检测更加的灵敏，超过传统的ELISA 实验。复星长征 T-SPOT.TB 被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T 细胞。T-SPOT.TB 记数每个活化的结核特异效应T 细胞。