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标题: 与大家分享复星 T-SPOT检验方法 [打印本页]

作者: completetv 时间: 2013-10-17 00:45:07 标题: 与大家分享复星 T-SPOT检验方法

复星 T-SPOT如何使用？买了复星 T-SPOT不会使用这不就坏了，经过我的琢磨，与大家分享一下复星 T-SPOT检验步骤。第一步，复星 T-SPOT试剂准备： (1) 微孔培养板。取出够数的8 孔反应板条恢复至室温待用，其余板条与干燥剂一起放回铝箔袋中。 (2) 取出结核特异抗原ESAT-6 （抗原A）待用。(3) 取出结核特异抗原CFP 10 （抗原B）待用。(4) 取出阳性质控待用。(5) 准备1:200 稀释的标记抗体工作液，计算足够用的浓缩标记抗体工作液在使用之前配制。 (6) 取出底物显色溶液恢复至室温待用。第二步，按复星 T-SPOT每个测定样本需微孔培养板4孔（空白对照、测试孔A和测试孔B、阳性质控对照）从铝箔包装中取出测试所需的微孔板条，推荐按以下方式排列：Ο空白对照 Ο抗原A Ο抗原B Ο植物血凝素PHA对照。第三步，1.从复星 T-SPOT包装袋中取出培养板条，嵌入培养板架内恢复至室温。注意只取出够用的培养板条，其余的放回储存。培养板条嵌入空的培养板内盖上垫板和盖子。架子，垫板和盖子可以保留重复使用。 2.每个样本需要用到4个检测孔：（1）加入50ul细胞培养液至每个空白对照孔内；（2）加入50ul抗原A溶液至每个必要的检测孔内；（3）加入50ul抗原B溶液至每个必要的检测孔内；（4）加入50ul阳性质控至每个细胞功能控制孔内。在这一步注意，不允许移液管枪头触碰反应孔底部的膜。枪头造成的压痕会导致孔内出现假象斑点。轻叩培养板使得试剂覆盖反应孔底部是必要的。避免过度用力导致反应孔间出现交叉污染。3.每个患者样本使用4个检测孔，每个检测孔加入100ul细胞终溶液（含有25万个活细胞）在第三步注意，每吸取100ul细胞终溶液前都必须保证彻底混匀。推荐每孔加样后都更的枪头以避免4个反应孔出现交叉污染。4.在37℃，保持湿润的含有5%的CO 培养箱中孵育 4. 为避免干扰，培养板应立即放入孵育箱中孵育16-20小时。不要把培养板堆叠，会导致温度的不均匀和空气的不流通。不按照推荐的时间孵育会导致不正确的检测结果。我总结了一下，在做这个复星 T-SPOT检验的时候，一定要细心认真。我们应该都做过化学实验，小心小心再小心就对了。

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